Методика предназначена для оценки микробиологического поражения смазочно-охлаждающих технологических средств на водной основе аэробной микрофлорой.
Аппаратура, материалы, реактивы:
-
2.3.5 - трифенилтетразолий хлористый (ТТХ) по ПРТУ 6-09-5328-68, (Шосткинский завод химреактивов);
-
термостат, обеспечивающий поддержание постоянной температуры ЗО±5 °С;
-
шкаф сушильный лабораторный по ГОСТ 19491-74;
-
пробирки стеклянные по ГОСТ 10515-63, диаметром 16 и 20 мм , высотой 150, 200 мм;
-
пипетки стеклянные градуированные вместимостью 1, 2, 5 и 10 мл по ГОСТ 12487-67;
-
цилиндры мерные по ГОСТ 1770-74 вместимостью 100 мм;
-
вода дистилированная по ГОСТ 6709-72;
-
весы аналитические типа АД-200 или аналогичные 2 класса точности.
Подготовка к испытанию:
Приготавливают 0,5%-ный раствор 2.3.5 - трифенилтетразолий хлористый. Для этого 0,5 г ТТХ взвешивают с точностью до 0,01 г, помещают в мерный цилиндр вместимостью 100 мл и доводят объём дистиллированной водой до метки. Для растворения ТТХ цилиндр с содержимым энергично взбалтывают.
Проведение испытания:
-
В вымытые, высушенные в сушильном шкафу (при 160 °С в течение 6-8 ч) пробирки наливают 9 мл 0,5%-ного раствора ТТХ и добавляют 1 мл эмульсии подлежащей испытанию (общее количество жидкости в пробирках составляет 10 мл).
-
Содержимое пробирок тщательно перемешивают.
-
Приготовленные таким образом образцы помещают в термостат при температуре 30±5 °С и выдерживают в течение 12-24 ч.
Оценка результатов испытания:
В основу метода положено определение дегидрогеназной активности микрофлоры, обитающей в СОТС, при помощи индикатора 2.3.5 — тетразолий хлорида (ТТХ).
Окисленная форма ТТХ бесцветна, восстановленная форма тетразолия, называемая формазаном, приобретает ярко-красный цвет. Восстановление ТТХ в формазан происходит при помощи дегидрогеназ микроорганизмов. Поэтому при микробиологическом поражении эмульсии содержимое в пробирках приобретает красную окраску, интенсивность которой зависит от количества микроорганизмов в системе.
Эмульсия, свободная от бактерий, после 24 ч инкубирования с ТТХ, сохраняет свой первоначальный цвет. Слабому микробиологическому поражению соответствует точечное или незначительное окрашивание в виде пятна (обычно на дне пробирки) или кольца.
Чем больше количество бактерий в системе, тем ярче её окраска и тем скорее она проявится. При очень сильном микробиологическом поражении, когда эмульсия СОТС практически испорчена, ярко-красная окраска всей эмульсии в пробирке появляется уже через 1-2 ч после внесения ТТХ.
Поэтому установлено 5 баллов окраски испытуемых образцов, которые отличаются друг от друга или по количеству окрашенного материала, или по интенсивности окраски. Каждому баллу окрашивания соответствует определённое количество бактерий в эмульсии.
Зависимость окраски образцов эмульсии от количества микроорганизмов
|
Характер и интенсивность окрашивания эмульсии с добавлением ТТХ |
Балл |
Количество бактерий, клеток/мм2 |
|
Цвет эмульсии не изменился |
0 |
0 |
|
Незначительное окрашивание в виде пятна или кольца |
1 |
0-103 |
|
Ярко-красная окраска в виде пятна (на дне пробирки) |
2 |
103-105 |
|
Розовая окраска всей эмульсии в пробирке |
3 |
105-107 |
|
Ярко-красная окраска всей эмульсии в пробирке |
4 |
108 и более |
Примечание:
При микробопоражении, соответствующем 0-1 баллам, эмульсия жизнеспособна; 2-3 - эмульсия подлежит корректировке; 4 - эмульсия полностью поражена и подлежит замене.
Руководствуясь данными, представленными в таблице, можно определить степень микробиологического поражения СОТС, установить время ввода в систему биоцида и его количество, определить время замены СОТС.
Литература:
-
"Эксплуатационные свойства водосмешиваемых СОТС" / Дубровский Ю.С., Румянцева Т.А., Чугай Г.Н. – Киев, 1991 г.- с. 55-57.
-
"Методики контроля и корректировок рабочих эмульсий (растворов) смазочно- охлаждающих технологических средств" . – Пермь, 2000г. - с.16-18.
